Superinfection exclusion studies using West Nile virus and Culex flavivirus strains from Argentina

In Argentina, many Flavivirus were recognised including West Nile virus (WNV). During 2009 several strains of Culex Flavivirus (CxFV), an insect-specific flavivirus, were isolated in the same region where circulation of WNV was detected. Hence, the objective of this study was to analyse the effect of co-infection in vitro assays using CxFV and WNV Argentinean strains in order to evaluate if CxFV could affect WNV replication. Our results showed that WNV replication was suppressed when multiplicity of infection (MOI) for CxFV was 10 or 100 times higher than WNV. Nevertheless, in vivo assays are necessary in order to evaluate the superinfection exclusion potential.

Cytokine and nitric oxide production by mouse macrophages infected with Brazilian flaviviruses / Produção de citocinas e óxido nítrico por macrófagos de camundongos infectados com flavivírus brasileiros

The Flaviviridae family, Flavivirus genus includes viruses that are transmitted to vertebrates by infected mosquitoes or ticks. The genus Flavivirus includes a variety of viruses that cause diseases such as acute febrile illness, encephalitis, and hemorrhagic fever. Flaviviruses primarily infect blood monocytes and tissue macrophages, which have been shown to be permissive, supporting viral replication and serving as virus reservoirs. On the other hand, these cells may have an important antiviral activity related to modulation by cytokine production and by the capacity of these cells to synthesize reactive free radicals such as nitric oxide (NO) which can have a microbicidal effect. The present study was performed in order to determine the production of cytokines interleukin-1beta (IL-1β), tumor necrosis factor -alpha (TNF-α), transforming growth factor- beta (TGF-β) and interferon -alpha (IFN-α) and NO by macrophages infected with one of four Brazilian flaviviruses, Bussuquara virus (BUSV), Yellow Fever virus (YFV), Rocio virus (ROCV) and Encephalitis Saint Louis virus (SLEV), and to verify the possible antiviral effect of NO during macrophage infection with ROCV. Moreover, we asked if the different viruses were able to regulate bacterial lipopolysaccharide (LPS) induced cytokine production. Our results showed that YFV and SLEV reduced the production of IL-1β and TGF-β by LPS-stimulated macrophages, while ROCV only diminished LPS-stimulated TGF-β synthesis. On the other hand, BUSV more likely favored an enhancement of the LPS-induced production of IL-1β by macrophages. Additionally, while most of the viruses stimulated the production of IFN-α, none of them altered the production of TNF-α by murine macrophages. Interestingly, all viruses induced synthesis of NO that was not correlated with antiviral activity for ROCV.

A família Flaviviridae, gênero flavivírus inclui vírus que são transmitidos para os vertebrados por mosquitos e carrapatos. O gênero flavivirus inclui uma variedade de vírus que causa doenças como febres, encefalites e febres hemorrágicas. Primeiramente, as flaviviroses infectam monócitos do sangue e macrófagos do tecido, o qual tem mostrado ser permissivo, suportando a replicação viral e servindo como reservatório de vírus. Por outro lado, essas células podem ter uma importante atividade antiviral relacionada à modulação pela produção de citocinas e pela capacidade destas células sintetizar reativos de radicais livres como óxido nítrico (NO) o qual tem efeito microbicida. O presente estudo foi realizado a fim de determinar a produção de citocinas interleucina -1 beta (IL-1β), fator de necrose tumoral-alfa (TNF-α), fator de crescimento transformador-beta (TGF-β), interferon - alfa (IFN-α) e NO pelos macrófagos infectados com os quatros flavivírus como vírus Bussuquara (BUSV), vírus da febre amarela (YFV), vírus Rocio (ROCV) e vírus da Encefalite de Saint Louis (SLEV), e verificar o possível efeito antiviral de NO durante a infecção dos macrófagos com ROCV. Além disso, com os diferentes vírus foram capazes de regular o lipopolissacarídeo bacteriano (LPS) indutor da produção de citocinas. Nossos resultados mostraram que YFV e SLEV reduziram a produção de IL-1β e TGF-β quando macrófagos foram estimulados pelo LPS, enquanto ROCV somente diminuiu a síntese de TGF-β estimulada pelo LPS. Entretanto, BUSV favoreceu uma acentuada produção de IL-1β pelos macrófagos estimulados pelo LPS, enquanto os vírus estimularam a produção de IFN-α, nenhum deles alterou a produção de TNF-α pelos macrófagos murinos. Interessantemente, todos os vírus induziram a síntese de NO que não esteve correlacionada com a atividade antiviral pelo ROCV.

Genes de susceptibilidad/resistencia a Flavivirus, implicaciones en la severidad de la infeccion / Susceptibility/Resistance Genes to Flavivirus, Implications on Disease Severity

Las infecciones transmitidas por Flavivirus se encuentran entre las enfermedades transmisibles con mayor incidencia en el mundo. La mayoría de ellas se manifiestan clínicamente como un síndrome febril que puede estar o no acompañado de diversos síntomas. La severidad de estas infecciones es variable con casos asintomáticos y otros que pueden llegar a ser letales. La razón de esta variabilidad en la presentación clínica, se desconoce en humanos. En ratones se han identificado cepas susceptibles y cepas resistentes a la infección por algunos Flavivirus. Por clonación posicional se mapeó el gen responsable de la resistencia a virus West Nile en el cromosoma 5 de ratón y se identificó como oligoadenilato sintetasa 1b (Oas1b). Este gen codifica una proteína que sintetiza oligómeros de adenina que activan la RNasaL, que a su vez degrada los RNAs virales. Células provenientes de ratones resistentes a la infección por Flavivirus producen menor cantidad de virus que su contraparte susceptible. Recientemente en humanos, se identificó un polimorfismo asociado con susceptibilidad a infección por virus West Nile en el gen de OasL. Sin embargo, el mecanismo bioquímico y molecular exacto por el cual se produce la susceptibilidad no ha sido completamente dilucidado. Este conocimiento permitiría aclarar aspectos de la fisiopatología de estas enfermedades y enfocar la terapéutica desde un punto de vista más específico.